бірнавіруси, бирнавирусы ; вірус інферкійного панкреатичного некрозу, вирус инфекционного панкреатического некроза ; культури клітин риб, культуры клеток рыб
During routine sampling and testing of catched wild-life fish species from Siret river of Chernivtsi region, an aquatic birnavirus was isolated from diseased rainbow trout Onhorhynchus mykiss. Preliminary examination of diseased fish revealed a range oflesions particularly in pancreatic tissue. Virus isolate grew in fish cell line RTG-2, FHM and EPC. IPNV caused morphological changes, such as vacuole enlargements and cells rounding. Subsequently cells scaled from a surface and characteristic cytopathiceffect (CPE) of virus on cells was visible. Examination by electron microscopy demonstrated that the isolated virus was ultrastructurally similar to IPNV. In addition after amplification of viral RNA incorporating three different primer pairs the IPNV specified PCR products were visible on agarose gel stained with ethidium bromide. The nucleotide sequences of amplified fragments were analysed and the prevalance of Ukrainian isolate, which was named "Karpaty", to Sp strain was revealed. The comparison of sequences of IPNVs VP2 and NS genes from NCBI and amplified fragments of IPNV strain "Karpaty" confirmed the high identity of 95-99% with Sp strain, firstly isolated in Denmark. Among the isolates of Sp strain the most related to IPNV "Karpaty" were viruses found in Great Britain, Norway, France, Turkey and Iran.
В роботі представлено результати дослідження вірусу інфекційного панкреатичного некрозу, виділеного від форелі з річки Сапет, Чернівецької області, Західна Україна. Досліджено репродукцію українського ізоляту IPNV "Карпати" в перевивних культурах клітин риб RTG-2, FHM та ЕРС. Всі три клітинні лінії виявились чутливими до вірусу. IPNV призводив до морфологічних змін, таких як вакуолізація цитоплазми та округлення клітин. Згодом клітини відшаровуватись від поверхні і проявлялась характерна цитопатична дія (ЦПД) вірусу на клітини. Результати електронно-мікроскопічних досліджень очищеної вірусної суспензії показали характерну для бірнавірусів морфологію та ультраструктуру. Віріони українського ізоляту IPNV "Карпати" мали гексагональну форму, їхній діаметр складав 70 ± 5 нм. Підібрано олігонуклеотидні праймери, специфічні до фрагментів генів VP2 та NS, та проведено оптимізацію постановки ПЛР. Аналіз нуклеотидних послідовностей ампліфікованих фрагментів IPNV "Карпати" свідчить, що український ізолят належить до штаму Sp. Ампліфіковані фрагменти кДНК на 95-99% ідентичні з послідовностями генів NS та VP2 інших ізолятів штаму Sp. Серед ізолятів штаму Sp найбільш спорідненими до українського ізоляту IPNV виявились віруси, виділені у Великобританії, Норвегії, Франції, Турції та Ірані.
В работе представлены результаты исследования вируса инфекционного панкреатического некроза, выделенного из форели реки Сапета, Черновицкой области, Западной Украины. Исследовали репродукцию украинского изолята IPNV "Карпаты" в культурах клеток рыб RTG-2, FHM и ЭДС. Все три клеточные линии оказались чувствительными к вирусу. IPNV приводил к морфологическим изменениям таким, как вакуолизация цитоплазмы и округление клеток. Впоследствии клетки отслаиваються от поверхности и проявляется характерное цитопатическое действие (ЦПД) вируса на клетки. Результаты электронно-микроскопических исследований очищенной вирусной суспензии показали характерную для бирнавирусив морфологию и ультраструктуру. Вирионы украинского изолята IPNV "Карпаты" имели гексагональную форму, их диаметр составлял 70 ± 5 нм. Подобраны олигонуклеотидные праймеры, специфичные к фрагментам генов VP2 и NS, и проведена оптимизация постановки ПЦР. Анализ нуклеотидных последовательностей амплифицированных фрагментов IPNV "Карпаты" свидетельствует, что украинский изолят относится к штамму Sp. Амплифицированные фрагменты кДНК на 95-99 % идентичны с последовательностями генов NS и VP2 других изолятов штамма Sp. Среди изолятов штамма Sp наиболее родственными к украинскому изоляту IPNV оказались вирусы, выделенные в Великобритании, Норвегии, Франции, Турции и Иране.
