Опис документа

The aim of current studies was to estimate participation of WaaL ligases in lipopolysaccharide (LPS) biosynthesis of Yersinia enterocolitica O:3 and O:8 (YeO3, YeO8) and determine the role of ligases for bacterial growth in conditions of osmotic pressure. The single and double waaL mutants were created by allelic exchange strategy. Phenotypes of created mutants were visualized by silver-stained DOC-PAGE and immunoblotting with specific OC and O-Ag monoclonal antibodies. The growth media with 3,5 % NaClwas used as a sensitivity assay. Deletion of waaLOS gene from YeO3 genome has a marked effect on OC ligation either in single or double mutants. The waaLPS deletion has an opposite effect on the OPS ligation - barely detected increasing of OPS bands. A dramatic decreasing of growth potential in hypertonic medium was observed only in YeO3 double ligase mutant. The importance of WaaL ligase for environmental stress resistance was detected only for YeO3 double mutant. Single ligase gene deletions not affect the osmotic resistance of bacteria, which could be explained as compensation of damaged ligase function by another ligase.

Метою даних досліджень була оцінка участі WaaL лігаз в синтезі ліпополісахариду (ЛПС) бактерій Yersinia enterocolitica O:3 і О:8 (YeO3, YeO8) та визначення участі лігаз у формуванні ростового потенціалу бактерій в умовах осмотичного тиску. Одиночні та подвійні мутанти waaL були створені шляхом обміну алелями. Фенотипи створених мутантів візуалізували за допомогою гелів DOC-PAGE, забарвлених сріблом, та імуноблоту зі специфічними до кору і О-Ag моноклональними антитілами. Для аналізу стресостійкості мутантів використовували гіпертонічне живильне середовище, в якому аналізували ростові криві бактерій. Видалення гену waaLOS із геному бактерій YeO3 суттєво впливає на лігування кору як в одиничних, так і у подвійних мутантів. Делеція гену waaLPS має протилежний вплив на лігування OPS - відбувається ледь помітна стимуляція. Різке зниження ростового потенціалу бактерій в гіпертонічному середовищі спостерігали тільки у подвійних мутантів бактерій YeO3. Участь WaaL лігаз у формуванні стійкості бактерій YeO3 до гіпертонічного середовища виявлена тільки при делеції обох генів лігаз. Одиночні мутанти за генами лігаз не проявляють особливої чутливості до осмотичного тиску в середовищі, можливо спрацьовує компенсаторний механізм.