Опис документа

Peroxiredoxins (Prxs) are versatile enzymes that demonstrate various cell functions as peroxidases, protein chaperones, functions of signal modulators and binding partners. It is well established that Prxs can interact with multiple proteins in cells, such as ASK1, Cdk5-p35, JNK, MIF, PDGF, TKR4 and others. In this study, we attempted to evaluate a possible association between ubiquitous Prx II and ATP/ADP buffering enzyme - brain-type creatine kinase (CKBB). Our co-immunoprecipitation (Co-IP) results from the A549 and HeLa cell lysates with overexpressed HA-Prx II and Flag-CKBB have demonstrated strong association between two proteins under non-stressed conditions. This protein interaction was enhanced by the heat treatment with further HA-Prx II precipitation to the immobilized Flag-CKBB depending on the temperature increase. Temperature induced oligomerization of Prx II may contribute to the formation of Prx II conglomerates, which in turn, can associate with CKBB and increase signal intensities on the blotted membranes. Thus, such association and oligomerization of Prx II could take part in recovery and protection of the CKBB enzyme activity from inactivation during heat-induced stress.

Пероксиредоксини (Prxs) - це універсальні ензими, які демонструють різноманіття клітинних функцій, таких як: пероксидазна, шаперонна, модуляторів сигнальних молекул та протеїнів-партнерів. Встановлено, що Prxs у клітині взаємодіють із багатьма функціональними протеїнами, наприклад: ASK1, Cdk5-p35, JNK, MIF, PDGF, TKR4 та ін. Звідси головною метою нашої роботи було дослідити можливу взаємодію між мультифункціональним протеїном Prx II сімейства Prxs і АТP/АDP буферним ензимом - креатинфосфокіназою головного мозку (CKBB). Завдяки реакції коімунопреципітації (Cо-IP) показано взаємодію надекспресованих HA-Prx II і Flag-CKBB протеїнів у лізатах клітин А549 та HeLa. Така протеїн-протеїнова асоціація була додатково індукована температурним стресом із подальшою преципітацією сигналу залежно від підвищення температури. Температурноіндукована олігомеризація Prx II, ймовірно, сприяє формуванню Prx II-конгломератів, які в свою чергу можуть зв'язуватись із CKBB та ініціювати підвищення інтенсивності сигналу на блоті. Таким чином, асоціація між Prx II та CKBB може бути пов"язана з відновленням та захистом ензиматичної активності CKBB, яка була втрачена під час інактивації за дії підвищеної температури.