ген, гени, гены ; клітини, клітина, клетки, клетка ; рибонуклеїнова кислота, рибонуклеиновая кислота, РНК ; серце, сердце, сor ; фізіологія, физиология, physiology

Беручи до уваги важливу роль убіквітинзалежного протеасомного протеолізу в обміні функціональних білків кардіоміоцитів (актину, міозину, іонних каналів тощо), становить інтерес дослідження механізмів клітинної смерті при специфічному заглушенні генаубіквітину (UBB) за допомогою РНК-інтерференції та моделюванні аноксії-реоксигенації. Інтерферуючі РНК вводили шляхом електропорації в ізольовані неонатальні кардіоміоцити, після чого первинна культура клітин підлягала дії аноксії (30 хв) з наступноюреоксигенацією (1 або 24 год). Відсоток живих, некротичних, апоптотичних та аутофагічних кардіоміоцитів визначали флуоресцентною мікроскопією. Кількісну оцінку експресії UBB і субодиниць протеасоми ?5 (PSMB5) та ?9 (PSMB9) проводили з використаннямполімеразної ланцюгової реакції в реальному часі. Показано, що при моделюванні аноксії-реоксигенації в режимі 30 хв - 24 год експресія мРНК UBB збільшувалася в 2,1 раза (Р<0,05). При введенні в культуру малих інтерферуючих РНК експресія мРНК цього білка зменшувалася в 2,4 раза (Р<0,05), при цьому знижувалася експресія мРНК субодиниць протеасоми ?5 і ?9 в 1,3 (Р>0,05) та 1,6 (Р<0,05) раза відповідно в порівнянні з контролем (введення індиферентних дволанцюгових РНК). При цьому зменшувалася кількість живих клітин у культурі (70,26 % ± 1,54 %, Р<0,05), збільшувалася кількість некротичних (25,92 % ± 1,52 %, Р>0,05), апоптотичних (4,32 % ± 0,53 %, Р>0,05) і клітин з ознаками аутофагії (38,2 % ± 3,81 %, Р<0,05). При цьому заглушення UBB при аноксії-реоксигенації (30 хв - 1 год) збільшувало кількість живих клітин на 3,7 % і зменшувало кількість некротичних кардіоміоцитів на 4,7 % та не впливало на популяцію апоптотичних та аутофагічних клітин. Отримані результати свідчать про те, що заглушення UBB, експресія якого збільшується при аноксії-реоксигенації, індукує некротичну та аутофагічну загибель інтактних культивованих кардіоміоцитів, однак деякою мірою збільшує резистентність цих клітин до аноксії-реоксигенації.

Фізіологічний журнал [Текст] : науково-теоретичний журнал. — Київ, 2010. — Т. 56, №04.